本发明公开了一种大豆苷的分离纯化方法，包括以下步骤：以乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水所组成的四元溶剂体系作为分离溶剂体系，采用高速离心分配色谱法对葛根黄酮提取物进行分离纯化，即可；所述的四元溶剂体系中，所述的乙酸乙酯、正丁醇、乙醇和水的体积比为20 : (3‑5) : (2‑3) : (20‑25)；所述的高速离心分配色谱法在高速离心分配色谱仪中进行。本发明大豆苷的分离纯化方法，分离时间短、分离能力强、分离到的大豆苷纯度高，并且溶剂消耗量小。