本发明涉及一种制备普兰林肽的方法。本发明的具体步骤为：A)通过液相合成二肽片段Fmoc‑Pro‑Pro‑OH；B)采用固相合成法，以氨基树脂为起始树脂，按照普兰林肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中28、29氨基酸偶联采用片段Fmoc‑Pro‑Pro‑OH偶联；C)使用碘作氧化剂固相环化，然后肽树脂裂解、在酸性条件下重结晶后纯化、脱盐、冻干后可以得到普兰林肽，其多肽杂质des‑Pro29‑普兰林肽含量小于0.1%。本发明提供了一种纯度高、成本低，适合规模化生产的普兰林肽的制备工艺，此工艺既能有效控制杂质des‑Pro29‑普兰林肽的含量又不影响普兰林肽的收率。