本发明一种UPLC法波长切换技术测定西红花有效成分含量及鉴别非法染色物的方法，其包括如下步骤：(1)配制含有西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红的混合对照品溶液；(2)配制西红花供试品溶液；(3)上色谱柱；(4)采用UPLC定时波长自动切换技术，对不同时间段的组分测定不同波长下吸光值；(5)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ、柠檬黄、金胺O、新品红和胭脂红进行定性检测；(6)对待测样品中的西红花苷‑I、西红花苷‑Ⅱ进行定量检测。本发明在活性成分含量测定的同时，更直观地判断样品中是否存在非法染色情况，避免了测定单个成分、逐步判断的繁琐步骤，准确灵敏、重复性好，且对仪器设备要求较低。采用该方法，能够更快速、全面有效的控制西红花质量，为企业产品生产所用的西红花原料质量控制提供方法依据。