本发明公开了一种抗原特异性的T淋巴细胞杂交瘤及其制备方法和应用。所述T淋巴细胞杂交瘤由抗原特异性OVA323‑339CD4+T淋巴细胞与T胸腺瘤细胞系BW5147.G.1.4融合而成，其保藏号为CCTCC NO：C201786。本发明制得的T杂交瘤细胞具有相对均匀性、稳定性及即时可用性等优于原发性T细胞的优点，其作为可靠、可重复、方便和高度特异性的T细胞试剂，可应用于抗原呈递过程中阻断免疫抑制分子作用的抗体的筛选，及在体外抗原递呈细胞(APC)的研究中的应用。