本发明公开了一种用于转化铜绿假单胞菌的转移质粒，其按照顺时针依次含有启动子ori、氨苄抗性基因AmpR、转座子序列、接合位点oriT，其中，转座子序列含有能使铜绿假单胞菌自主发光的碱基序列以及抗性基因，抗性基因的两端带有difR和difL序列；还公开了一种无抗性标记的自主发光的铜绿假单胞菌，所述铜绿假单胞菌的基因组中含有能使细菌自主发光的基因，且铜绿假单胞菌的基因组中没有抗性筛选基因。本发明中由转移质粒pUC18T‑mini‑Tn7T‑lux‑dif‑Apr和辅助质粒参与构建的自主发光铜绿假单胞菌，不需要添加任何底物即可发光；并且，在黑暗环境中通过肉眼便能看到发光菌落；没有抗性基因，其生理状态、药物敏感性更贴近于野生型，更加适用于大规模操作；发光强度高、稳定性强。