本发明公开了一种重组新城疫病毒及其在制备抗癌药物中的应用。本发明提供的重组新城疫病毒，其制备方法包括如下步骤：将重组质粒pBrClone30/DR5‑TRAIL、pBL‑N质粒、pBL‑P质粒和pBL‑L质粒共转染哺乳动物细胞并培养，得到所述重组新城疫病毒；所述重组质粒pBrClone30/DR5‑TRAIL为具有序列表的序列3自5’末端第2703‑19872位核苷酸所示的DNA分子的质粒。本发明还保护所述重组新城疫病毒在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下(a)和/或(b)和/或(c)：(a)抑制肿瘤细胞增殖；(b)杀伤肿瘤细胞；(c)治疗肿瘤。本发明为改善TRAIL抵抗以提高抗肿瘤效果提供了全新的方法，对于肿瘤治疗具有重大的应用价值。