本发明公开了一种细胞制品中真菌污染检测的通用引物、试剂盒及检测方法，其中通用引物包括用以扩增真菌rDNA的上游引物和下游引物，所述上游引物和下游引物序列与真菌26S rDNA序列的保守区域互补，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。实验证明，利用本发明所提供的引物对待测样本进行荧光定量PCR检测，极大提高了真菌检测的通用性；同时也可避免检测目的片段与细胞制品中含有的人基因组序列的同源性，为细胞产品早期的检测提供了快速准确的方法。本发明的检测方法操作简单，无需复杂的核酸提取过程，只需将细胞制品中污染的真菌通过短暂离心富集后用裂解液裂解即可作为模板进行定量PCR检测，能够在3小时内完成细胞制品中常见真菌的检测。