本发明公开了一种叶酸制剂及其制备方法和应用，属于微生物技术领域以及医药技术领域。本发明的叶酸制备方法通过将植物乳杆菌接种于含有氨基苯甲酸(PABA)、乳酸钠的发酵培养基中发酵以及控制植物乳杆菌在低生长速率，大大提高了植物乳杆菌生产叶酸的能力，将发酵生产叶酸的产量由0.8μg/mL提升至2.7μg/mL；本发明的叶酸制剂同时含有叶酸和不低于1×1011CFU/L的活性植物乳杆菌，既具有补充人体叶酸的作用，也有益于人体肠道健康；将本发明的叶酸制剂于室温(25℃)下放置8个月，其含有的活性植物乳杆菌仍可以存活75％以上。