本发明提供了一种AHU377及其异构体的色谱分析方法，该方法采用高效液相色谱，以键合型手性色谱柱为色谱柱，三氟乙酸与另外两种有机溶剂以一定配比组成三元流动相，流动相的流速为0.7‑1.0mL/min。该方法可以简单、准确的在一个条件下将AHU377及其三个异构体进行有效的分离。