本发明提供了一种荧光金纳米簇在荧光法检测丙酮酸和/或丙酮酸氧化酶中的应用。本发明将荧光金纳米簇探针用于检测丙酮酸和/或丙酮酸氧化酶，具有灵敏度高，良好的选择性，线性范围较宽等特点。本发明建立的通过荧光纳米簇发射荧光方法来检测丙酮酸，不仅避免了生物体其他因素的干扰，可以选择性的检测血液、尿液中丙酮酸的浓度，可以无创地检测丙酮酸浓度；而且使用荧光发射的方法检测丙酮酸的浓度，而不是使用事先制备好的荧光金属纳米簇，最大限度地避免了实验中的假信号可能带来的干扰；同时检测过程中同时生成的荧光金纳米簇具有优良的荧光性质，在光学材料、生物医学等领域上的应用具有重要的意义。