本发明公开了一种耐热酯酶基因、含有该基因的工程菌及其编码蛋白和应用，该酯酶基因estA' 碱基序列为SEQ ID NO.1，将基因estA' 与质粒连接构建重组表达载体pET28b‑estA' ，表达质粒转化大肠杆菌构建重组工程菌Rosetta(DE3)pLysS/pET28b‑estA' ；酯酶在大肠杆菌中获得异源表达，采用对硝基苯酚法鉴定酯酶EstA的酶学性质，具有高度热稳定性，本发明的目的是为该酯酶的生产及其在医药、食品、精细化工等领域的工业应用提供服务，尤其是在需要高温催化时，该酶更为适宜。