本发明公开了一种阳春砂叶肉原生质体分离纯化的方法，包括材料的制备与预处理，采用酶解法进行原生质体的分离，采用沉降法与漂流法结合法纯化原生质体等步骤。本发明通过研究影响原生质体产量和活力的因素，如材料是否经过预处理、酶种类及浓度、酶解时间、渗透压调节剂浓度、不同纯化方法对叶肉细胞原生质体纯化效果的影响，优化了阳春砂叶肉原生质体分离纯化的实验条件，以获得高产和高活力的阳春砂原生质体，为阳春砂通过体细胞融合培育新品种奠定了基础。