本发明公开了一株产L‑异亮氨酸的黄色短杆菌重组菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明利用基因工程手段强化了黄色短杆菌中乙酰羟基酸合酶、二羟酸还原异构酶和支链氨基酸转氨酶，并异源表达tdcB编码的分解代谢苏氨酸脱水酶，从而构建了一株L‑异亮氨酸高产菌株B.flavum I12/pEC‑XK99E‑ilvBNCE‑tdcB。该重组菌株积累异亮氨酸的产量提高到22.65g/L，比出发菌株提高了25.48％，最大生物量为达到20.95g DCW/L。此发明可将赖氨酸途经碳源转向L‑异亮氨酸，为构建L‑异亮氨酸高产菌株提供崭新的思路。