本发明公开了一种检测中药材污染杂色曲霉毒素产毒真菌的PCR引物、方法及试剂盒。基于PCR检测方法，包括能在反应管中进行PCR反应的引物对。本发明建立了一种不经过分离纯化，直接检测中药材污染杂色曲霉毒素产毒真菌的PCR体系，各引物特异性强，方法的检出限为101～102CFU/g，检测灵敏度高。