本发明涉及生物医药中哺乳动物细胞培养技术领域，具体而言，涉及高密度接种培养中种子细胞的培养方法及其应用。本发明在N‑1种子细胞培养和后续(可选的)扩大培养中，通过流加补料培养增加活细胞密度。便于放大至生产规模，操作简单，成本低廉；还可以在更短的周期获得相同或更高产量和质量的蛋白，并在相同的生产周期可以获得更高的蛋白产量，可提高＞20％的产量。