本发明提供了一种基于人源化CD20抗体和CD19抗体的新型双特异CD20‑CD19‑CAR载体的构建及应用。具体地，本发明提供了一种嵌合抗原受体CAR，所述CAR含有靶向CD19的scFv和靶向CD20的scFv，靶向CD19的scFv含有SEQ ID No. : 8所示的重链可变区和SEQ ID No. : 9所示的轻链可变区，靶向CD20的scFv含有SEQ ID No. : 10所示的重链可变区和SEQ ID No. : 11所示的轻链可变区。利用本发明构建的双特异CD20‑CD19‑CAR载体的CAR‑T细胞展现出非常好的体外杀伤效果。