本发明公开了一种达托霉素发酵培养基及其制备方法。该发酵培养基包括7.2‑11g/100mL的碳源，1.65‑4.0g/100mL的氮源，0.086‑0.5g/100mL的无机盐，0‑0.1g/100mL的微量元素；所述碳源包括麦芽糊精和碳源A，所述麦芽糊精的用量为7.2‑9g/100mL，所述碳源A为糖蜜或红糖，所述碳源A的用量为0‑1.8g/100mL；所述氮源为榴花酵母粉、黄豆粉、豆粕、花生粉和羽毛粉中的一种或多种。本发明的发酵培养基用于培养玫瑰孢链霉菌可以提高达托霉素的产量，同时大大降低生产成本，具有非常好的工业化应用前景。