本发明公开了一种I型牛疱疹病毒重组蛋白，涉及生物医药技术领域，一种I型牛疱疹病毒重组蛋白的制备方法包括以下步骤 : (1)查找I型牛疱疹病毒中含有主要抗原决定簇的gD抗原；(2)优化I型牛疱疹病毒gD抗原基因的密码子，合成核酸序列并进行表达；(3)构建针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体，调取单链抗体scFv的基因；(4)重组优化的I型牛疱疹病毒gD抗原基因和针对I型牛疱疹病毒gD抗原的单链抗体scFv的基因，并进行诱导表达；(5)纯化及复性I型牛疱疹病毒重组蛋白。本发明在开发单克隆抗体的基础上又进行重组抗体技术开发单链抗体，易于在细胞中表达，可以在真核或者原核细胞中表达，可大量生产，成本较低。