本发明公开一种蝼蛄提取物及其制备方法。该制备方法，包括如下步骤：(1)将石油醚提取原料蝼蛄后所得提取液，减压浓缩至重量基本不变；(2)采用高速逆流色谱分离，其中：溶剂系统为氯仿、甲醇和水的混合液，上相为固定相，下相为流动相；收集60‑120min的洗脱液后，减压浓缩即可。该制备方法，简化了步骤，生产成本下降。该蝼蛄提取物对三阴乳腺癌细胞具有明显体外抑制活性。