本发明涉及一种利用CRISPR/Cas9+AAV制备通用型CAR‑T细胞的方法，属于免疫细胞治疗领域。本发明利用CRISPR/Cas9+AAV敲除免疫检查点PD‑1、人类白细胞抗原(HLA)以及TCR，多基因敲除制备通用型CAR‑T细胞，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行精确基因敲除，同时与腺相关病毒(AAV)融合运用，代替慢病毒实现精确基因敲入，避免慢病毒随机整合潜在的风险。本发明的方法可以实现多靶点基因敲入和敲除，构建通用型CAR‑T细胞用于异体治疗，解决传统CAR‑T细胞治疗存在的慢病毒随机插入性突变风险、自体CAR‑T的设计及培养制备成本过高、制备周期长，细胞数量及扩增能力不足等问题。