本发明公开了一种小胶质细胞的培养方法，包括以下步骤：(1)分离大鼠新生鼠的大脑皮层组织，将组织剪碎、加HBSS离心分离、消化液消化、终止消化、过滤得到大脑皮层混合细胞；(2)将步骤(1)大脑皮层混合细胞铺板培养；(3)分离步骤(2)培养得到的小胶质细胞。本发明综合考虑体内小胶质细胞的生长环境，建立成纤维细胞与混合胶质细胞共培养的新的培养方法，再用温和胰酶法获得小胶质细胞，提高了小胶质细胞的产量，缩短了培养时间。