提供了一种结晶型胆酸衍生物游离碱、其制备方法和应用，所述胆酸衍生物游离碱化学名称为(5R)‑5‑((2R)‑2‑((3R, 5S, 6R, 7R, 10S, 13R)‑6‑乙基‑3, 7‑二羟‑10, 13‑二甲基十六氢‑1H‑环戊二烯并[a]菲‑17‑基)丙基)噻唑烷‑2, 4‑二酮，其粉末X射线衍射图包括位于16.5±0.2°，13.6±0.2°，12.1±0.2°，20.4±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，还涉及光学纯的该胆酸衍生物及其制备方法和应用，制备得到光学异构体的纯度达90.0％以上，解决了现有技术中难以分离得到光学纯度的问题。另外，还提供了一种胆酸衍生物的制备方法及其应用。所述制备方法克服了现有技术中存在的缺陷，多步反应在常温下即可完成反应，所得产物纯度好、收率高，工艺可操作性强，工艺安全性也得到大幅提高，适合工业化应用。