本发明公开了一种生物样品中羟基多甲氧基黄酮化合物及其代谢产物的检测方法，包括如下步骤：(1)对生物样品进行处理；和(2)采用超高效液相色谱‑质谱联用仪检测所述待测溶液。本发明的检测方法能够检测到生物样品中较多的5‑羟基‑6, 7, 4’, 5’‑四甲氧基黄酮代谢产物。