本发明涉及发酵工程技术领域，具体涉及一种提高N‑乙酰氨基葡萄糖产量的发酵方法。发酵过程中，当发酵液的OD660nm大于或等于25时，按照前5h以5mL/h的流加速度流加半乳糖和L‑天门冬氨酸的混合液，之后以3mL/h的流速流加至发酵结束，所述半乳糖和L‑天门冬氨酸的质量比为25 : 3。本发明在发酵培养过程中，当OD660nm大于或等于25时流加半乳糖和L‑天门冬氨酸的混合液，控制半乳糖和L‑天门冬氨酸的浓度和比例，通过在半乳糖中添加L‑天门冬氨酸使得glmS与gfa1过量表达增加氨基葡萄糖的积累浓度，最后将N‑乙酰氨基葡萄糖产量提高至120g/L。