本发明属于医药生物领域，具体涉及联合MSLN单链抗体和PD‑1mAb杀伤胃癌细胞的CAR载体及其构建方法和应用。该CAR载体包括MSLN单链抗体和PD‑1mAb，CAR结构为CD8leader‑MSLN scfv‑CD8α‑CD28‑CD137‑CD3ζ‑IRES‑PD‑1mAb，以病毒感染方式获得CAR‑T细胞(Chimeric Antigen Receptor T‑Cell)，通过表达CAR结构，靶向识别和杀伤MSLN阳性表达的胃癌细胞。PD‑1mAb与T细胞表面的PD‑1结合，阻断PD‑1和PD‑L1的结合，从而上调T细胞的生长和增殖，使CAR‑T细胞表现出更强的肿瘤细胞杀伤能力。