本发明提供了一种人工抗原的制备方法及其应用，该制备方法包括通过交联剂将载体蛋白和N1‑乙酰精胺或N‑乙酰半胱氨酸甲酯偶联，得到人工抗原。本发明还公开了由上述制备方法制备的人工抗原，以及由上述人工抗原所产生的抗体在检测N1, N12‑二乙酰精胺中的应用。此外，本发明还公开了上述抗体在ELISA法、胶体金免疫层析法等免疫学检测方法中的应用。