本发明申请属于生物医药技术领域，具体公开了一种线粒体靶向的声响应性的多层次肿瘤深穿透声敏剂的制备方法，包括以下步骤：(1)合成具有IR780的脂膜；(2)水化步骤(1)得到的脂膜，加入PFP，在冰浴下声震、离心后制得声敏剂IR780‑NDs。采用本制备方法制得的声敏剂能够多层次深穿透肿瘤，以及在肿瘤中均匀分布。