本发明公开了一种利用酵素进行恒温核酸杂交的方法，所述的方法是通过酵素活性的生物性方法，改变既有以温度变化的物理性反应步骤。本发明是将待分析双股链核酸、相对应的专一性核酸探针与酵素一同混合，即可于一低恒温环境下，一步骤地完成核酸杂交反应。