本发明公开了一株大肠埃希氏菌工程菌株及其构建方法，以及利用该菌株进行的鲨肌醇的制造方法，属于生物技术领域，其特征在于包括稳定的重组表达质粒及重组表达质粒构建大肠埃希氏菌工程菌株pSI3的方法和利用得到的所述的重组大肠埃希氏菌工程菌株pSI3催化肌醇生产鲨肌醇的方法，本发明的有益效果是 : 利用该工程菌株的静息细胞法催化肌醇生产鲨肌醇，由于肌醇转运蛋白的存在，底物肌醇的浓度在反应温度下可得到最大化，可以充分利用细胞进行鲨肌醇的转化生产，利用该工程菌株进行发酵培养，处理后菌体可以收集进行静息细胞反应，发酵液粗处理后既可以用于鲨肌醇的分离提取，也可以重复用于菌株的发酵培养。