本发明涉及一种自然杀伤细胞体外纯培养的方法，其包括如下步骤：采集外周血，分离单个核细胞，采用结合有特异性抗体的磁珠去除非NK细胞，得NK细胞群；将NK细胞群置于多重抗体包被的培养瓶中采用包含IL‑2、IL‑7、IL‑15、anti‑CD16、OK432以及灭活的自体血清的完全培养基进行激活培养，得激活的NK细胞群；将激活的NK细胞群置于无抗体包被的培养瓶中继续进行扩增培养，即得。该方法不使用任何异源血清成分和滋养层细胞，能够整体上取得较高的扩增效率，同时使扩增后的NK细胞纯度达90％以上，实现了体外高效纯培养，便于满足临床使用。