本发明提供了一种油佐剂疫苗的快速定性定量检测方法，包括以下步骤：将口蹄疫合成肽疫苗破乳，将破乳后的抗原样品采用竞争ELISA方法进行定性定量检测；所述破乳方法为：将口蹄疫合成疫苗与破乳剂混合，分层后得水相抗原样品；所述破乳剂包括有机溶剂与酸的混合物，所述有机溶剂选自乙腈、正丁醇、苯甲醇、丁基二乙二醇、乙醇中的一种，所述酸选自盐酸、乙酸、甲酸、三氟乙酸中的一种。本发明提供的破乳方法破乳能力更强，使样品无需进行纯化处理即可测定，缩短了检测时间；本发明采用竞争ELISA方法进行定性定量检测抗原浓度，得到的标准曲线斜率会大于常规间接竞争法，从而大大提高了检测灵敏度。