本发明提供了一种CHO细胞表达凝血酶‑Fc融合蛋白的方法，其包括如下步骤：(1)构建表达质粒：分别构建表达凝血酶a‑亚基和b‑亚基与人IgG1单克隆抗体不变区Fc段的重组表达载体质粒；(2)细胞转染：使用上述重组表达载体质粒转染CHO细胞；(3)对上述CHO细胞进行驯化培养，收集上清液。本发明的方法高效稳定地成功表达了有酶活性的双亚基融合蛋白，即CHO细胞表达凝血酶‑Fc融合蛋白。