本发明属于中药注射液检测技术领域，尤其涉及一种中药注射液中乙酸、丙酸和丁酸的检测方法和应用，该检测方法为：用盐酸乙醇混合溶液对所述中药注射液进行稀释，用气相色谱法检测所述中药注射液中的乙酸、丙酸和丁酸，所述检测方法为内标法。该检测方法能够快速、准确地同时检测中药注射液中乙酸、丙酸和丁酸的含量，专属性强、重现性好，能够弥补现有标准和其他定量方法的不足。通过该检测方法，能够快速、准确地同时进行疏血通注射液中该三种成分的含量测定，对于提高疏血通注射液的质量标准具有重要意义。