本发明提供了一种抗菌敷料及其制备方法和应用，涉及医用敷料技术领域。该抗菌敷料包括敷料载体和纳米过氧化银，敷料载体为水溶性高分子形成的微纳米纤维结构，纳米过氧化银分布在敷料载体内部和/或表面，其中，高价态的纳米过氧化银相对于可溶性银盐和纳米银而言，具有更优的抗菌效果，并且其不溶性保证其不溶于水，不会随着体液进入人体；另外，敷料载体的微纳米纤维结构使其具有更高的比表面积，因此接触体液时，其负载的纳米过氧化银具有更多的接触细菌机会，从而以更低的用量达到更好的抗菌效果，降低成本，进一步保证生物安全性。本发明还提供了上述抗菌敷料的制备方法，工艺简单、稳定，适合于工业化生产。