本发明涉及一种电化学发光聚合物纳米粒的制备方法，包括以下步骤：将电化学发光聚合物与非发光聚合物在溶剂中混合，发生交联反应后得到电化学发光聚合物纳米粒，非发光聚合物为导电性聚合物。本发明还提供了采用上述方法所制备的电化学发光聚合物纳米粒在生物标记中的应用。采用本发明的方法，可制备出信号增强且结构稳定的电化学发光纳米粒，其具有良好的水溶性，粒径均一，粒径约为20nm，由于表面存在大量的活泼基团，有利于生物标记，在实现高灵敏度的生物医药检测方面将具有广泛的应用。