本发明公开了一种酶法制备磺苄西林钠的工艺，属于医药化工技术领域。该方法以青霉素发酵液为起始原料，省去6‑氨基青霉烷酸结晶、洗涤、干燥等步骤，在青霉素酰化酶的作用下与磺苯乙酰氯直接反应得到磺苄西林钠。与化学合成方法相比，本发明提供的制备工艺操作简单，能耗小，安全性高，稳定性好。因此，本发明在工业生产的推广应用中是一种低成本、高效率的生产工艺。