本发明是一种多靶项微流测试卡，包括位于顶部的盖板、夹在中间的托板和位于底部的底板；所述盖板顶部左侧设有前后布置的一排上微反应室观察区；所述盖板顶部右侧中部设有加样区，所述加样区中部设有点样口。一种多靶项微流测试卡的制备方法，包括的步骤有：(1)、按需求将所述盖板、所述底板和所述托板的原料板切割成规定的规格大小；(2)、将原料板使用所述盖板、所述底板和所述托板的专用模具制成所述盖板和所述底板所述托板。本发明所述的一种多靶项微流测试卡及制备方法，一种多靶项微流测试卡可实现多靶向，而且微流控测试卡的生产工艺成本低，步骤不复杂，工序少。