本发明公开了一种修饰生物探针的纳米孔检测装置，包括装置本体，所述装置本体内部设置有第一基底层，所述第一基底层开设有至少一个微孔，沿所述微孔的轴向，所述微孔顶部设置有修饰有探针的纳米孔道，所述微孔底部设置有具有蛋白纳米孔阵列的第二基底层。检测时，修饰有探针的纳米孔道可以捕获特异性生物标记物，产生特定的电流变化，通过分析电流变化即可分析样品中是否含有待检测物及浓度，通过向纳米孔道修饰特定的生物探针，大大扩展了检测范围，且具有很高的特异性和灵敏性，可广泛应用于基于纳米孔技术的疾病检测和分析。还公开了该检测装置的制作方法，制作方法简单、成本低廉，得到的装置易于携带，可即时检测。