本发明公开了一种三叶青多糖及其在制备免疫调节剂中的应用，将三叶青粉末加入双蒸水中，回流浸提，获得三叶青藤叶部位粗多糖；将三叶青藤叶部位粗多糖溶于双蒸水，Sevag法除蛋白，接着脱盐，然后过阴离子交换柱，收集0.3‑0.6mol/L NaCl洗脱峰，最后除去NaCl得三叶青藤叶部位多糖。本发明所述三叶青藤叶部位多糖能激活TLR4通路，显著提高OVA免疫小鼠血清抗OVA特异性抗体IgG水平，能显著促进OVA刺激下的淋巴细胞增殖，同时能显著增加LPS诱导的B淋巴细胞增殖。