本申请公开用于纯化中性人乳寡糖(中性HMO)的方法。所述方法使用模拟移动床色(SMB)谱，允许连续纯化大量具有高纯度的HMOs。与中性HMOs的化学合成途径及其随后的纯化不同，本发明的方法允许提供不含有害化学物质如微量的重金属或有机溶剂的HMOs。单独的中性HMO产物可以通过喷雾干燥以固体形式获得或以浓缩浆的形式获得。提供的中性HMO是非常适用于在食品应用中使用。