本发明公开了一种抗肿瘤药物筛选试剂盒及其使用方法，属于生物医药技术领域。本发明试剂盒包括：秀丽隐杆线虫、线虫培养基、大肠杆菌、染料。本发明利用染料2' , 7' ‑二氯二氢荧光素二乙酯对突变体和野生型秀丽隐杆线虫不同的染色效果来达到操作简单、快速、高效、准确、高通量筛选出有效的抗肿瘤药物的目的，为广大抗肿瘤药物的研发人员节约了时间和成本。