本发明公开了一种鱼鳞明胶高抗氧化性肽的制备方法，以鱼鳞为原料，对鱼鳞进行脱钙，再采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶对鱼鳞进行二步酶解，获得鱼鳞明胶高抗氧化性肽。本发明以草鱼加工副产物鱼鳞为原料，酸法脱钙加速胶原蛋白的溶出，提高抗氧化肽的纯度，先采用碱性蛋白酶一步酶解，后胰蛋白酶对酶解物进行二步酶解，增加抗氧化肽含量。本发明制备高抗氧化肽的方法操作简单，无毒无害，容易实现，制得的抗氧化肽的•OH清除能力高于二丁基羟基甲苯(BHT)，有良好的抗氧化性，在保健食品、医药、化妆品等领域具有很高的实用价值。