本发明公开了一种植物乳杆菌中亚硝酸盐还原酶基因的乳酸克鲁维酵母真核表达方法。该方法以植物乳杆菌基因组为模板，设计特异性引物扩增亚硝酸盐还原酶基因序列，在其两端分别引入酶切位点，并亚克隆至表达载体pKLAC2构建得到重组质粒，酶切线性化后电转化乳酸克鲁维酵母，筛选阳性克隆转化子，最后经种子培养和液体发酵培养，取发酵液上清，即得亚硝酸盐还原酶表达产物。本发明制备得到的重组亚硝酸盐还原酶具有较高的酶活，且酶活性稳定，为亚硝酸盐还原酶的工业化生产奠定了基础，可用于食品、医药等领域。