本发明通过设计单条含有多点突变或饱和突变的引物(15‑25bp)，结合载体本身的通用引物(20bp)，在高保真聚合酶作用下，扩增出带有多个突变信息的长片段序列(500‑1500bp)；再以获得的长片段序列为引物，经过20‑30个循环后获得重组质粒的全长序列；全长序列转化感受态细胞后，便可获得理想的突变体或突变库。本方法有效的降低了多点突变的失败率和进化突变库中具有相同突变的概率，同时在引物的合成上使得成本降低了50％，在分子生物学的应用上有着重要意义。