本发明公开了一种从啤酒花中分离黄腐酚的方法，属于生物医药技术领域，包括以下步骤：1)取啤酒花渣，用丙酮提取，过滤后花渣用丙酮再洗涤一次，合并两次得到滤液；2)将滤液浓缩，加入二氯甲烷，过滤，除去不溶于二氯甲烷的杂质，浓缩，得到浓缩液；3)将浓缩液上硅胶柱层析，洗脱，收集含有黄腐酚的部分，浓缩后置于冰箱中，过滤得到黄棕色粉末，即为黄腐酚粗品；4)将粗品用重结晶得橙色结晶粉末黄腐酚。本发明工艺精简，成本低廉，提取制备过程环境友好。该方法使用啤酒花提取alpha酸后的废料为原料，制备高纯度的黄腐酚。