本发明涉及生物医药技术领域，特别是用于疫苗佐剂的一种细胞免疫佐剂TSA‑41的制备方法及应用。本发明为人工设计一种基因序列SEQ ID NO.1，通过基因工程技术，将SEQ ID NO.1重组基因序列插入大肠杆菌表达系统，通过大肠杆菌高效表达出具有二聚体结构的可溶性重组蛋白TSA‑41，所得TSA‑41重组蛋白通过分离、纯化，最终得到高纯度、高活性的重组蛋白。该重组蛋白作为佐剂可以有效提高细胞免疫类生物疫苗的免疫效果，避免了重组蛋白复性折叠的工艺步骤，大大提高了制备效率，有利于工业化生产。