本发明提供了一种重度免疫缺陷猪模型及其构建方法和应用，所述方法利用BE3点突变工具敲除RAG1、RAG2和IL2RG基因获得免疫缺陷猪模型；本发明通过C变T点突变工具获得多基因敲除的免疫缺陷猪模型，安全性更好，免疫缺陷程度更高，完全缺失T细胞、B细胞和NK细胞，更利于后续的应用研究，构建方法简洁高效，具有广阔的应用前景和巨大的市场价值。