本发明提出了一种自体真皮成纤维细胞皮片的构建方法，所述方法为：将体外扩增的真皮成纤维细胞接种到经过脱细胞、脱脂、脱核酸处理的羊膜组织进行细胞固化，构建真皮成纤维细胞‑羊膜组织的复合结构，在细胞培养条件下富集高纯度细胞，获得所述自体真皮成纤维细胞皮片。本发明还提出了由该方法构建得到的自体真皮成纤维细胞皮片。本发明自体真皮成纤维细胞皮片可用于烧伤创伤、大面积植皮、及其他急需大面积皮肤缺损的临床需求，具有低排异、可持续供应等优点，有广泛应用前景。