本发明公开了一种丹绿补肾胶囊中次野鸢尾黄素和胡椒碱的含量测定方法，涉及医药检测技术领域。色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相：乙腈：0.1‑0.2wt%磷酸水溶液(体积比49 : 51)；波长：266±4nm；柱温：35‑45℃；流速：0.9‑1.1ml/min；取次野鸢尾黄素和胡椒碱对照品，加甲醇制成含次野鸢尾黄素和胡椒碱的对照品溶液；取丹绿补肾胶囊内容物，混匀，加入甲醇溶解，过滤，取续滤液作为供试品溶液；吸取对照品与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定次野鸢尾黄素和胡椒碱含量。本方法同时测定次野鸢尾黄素和胡椒碱含量，两种成分能达到良好的分离效果，且操作简单，快捷，准确，易于掌握。