一种夏枯草总黄酮的提取纯化方法，步骤为：(1)取夏枯草药材粉碎过筛，加1‑30倍量5‑95%的乙醇，回流提取1‑3次，每次1‑5 h，过滤，合并滤液，得提取液；(2)将所述提取液加热浓缩至浓度为0.05‑0.5 g/mL，再调节pH值为1‑7，得上样液；(3)将所述上样液，上NKA‑9大孔吸附树脂，用1‑10 BV水除杂后，再用1‑10BV的10‑95%乙醇洗脱；(4)连续多次经过步骤3的纯化工艺得富集物，减压干燥至粉末或浸膏，即得。本发明还提供夏枯草总黄酮在制备治疗肝癌药物中的应用，通过药理药效研究表明夏枯草总黄酮具有明显的抗肝肿瘤活性，并呈明显的量效关系，为开发以夏枯草总黄酮富集物为原料的具有广泛临床使用价值和商业开发价值的抗肝肿瘤新药和工业生产提供理论和实验依据。